Ключова разлика - Директен срещу индиректен ELISA
Ензимно-свързан имуноанализ (ELISA), известен също като ензимен имуноанализ, е серологичен тест, който открива антитела в кръвта. Използва се като диагностично средство за установяване дали пациентът е бил изложен на определен вид вирус или друг инфекциозен агент (антиген) и дали тялото е произвело антитела срещу инфекцията. ELISA може също да идентифицира минали и настоящи инфекции. Следователно, ELISA често се използва като предкрининг тест от лекарите преди задълбочен анализ на заболявания. Този тест може да се извърши в лабораторията, като се вземе кръвна проба от пациента. Има два типа ELISA тест: директен ELISA и индиректен ELISA. Ключовата разлика между директния и индиректния ELISA е, че индиректният ELISA е по-чувствителен и изисква добавянето на вторично антитяло, докато директният ELISA е по-малко чувствителен и използва само първично антитяло.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е Direct ELISA
3. Какво е непряка ELISA
4. Сравнение успоредно - Direct vs Indirect ELISA
5. Резюме
Какво представлява Direct ELISA?
ELISA е диагностичен тест за заболяване, извършен за идентифициране на наличието на определени антигени или антитела в кръвта. Извършва се като анализ на плоча. Той използва антитела, свързани с лесно изследвани ензими. Присъствието на антигени в серумната проба се свързва със специфични антитела, свързани с ензими. В последния етап се добавя специфичен субстрат, който реагира с ензима. Ензимът превръща субстрата в оцветен или произвеждащ сигнал продукт. Промяната в цвета на химичния субстрат разкрива наличието на определено антитяло в серумната проба. Директният ELISA тест използва само първично антитяло, свързано с ензима. При свързване с антигена той бързо променя цвета си, което показва наличието на инфекциозния агент в кръвта. Въпреки това,интензивността на сигналите е по-слаба при директния ELISA, тъй като епитопите са ограничени до свързване на антигените. Следователно, директният ELISA е по-малко чувствителен в сравнение с косвения ELISA.
Фигура 01: Директен тест ELISA
Какво представлява индиректният ELISA?
ELISA може да се извърши, като се използват два вида антитела, а именно; първично антитяло и вторично антитяло. Индиректният инструмент ELISA използва и двата вида антитела за усилване на сигналите за по-добро откриване. Индиректната ELISA техника се извършва, както следва.
- Плаките се инкубират с антигени и се измиват, за да блокират неспецифичното свързване.
- След това се добавят първични антитела и се промиват.
- Добавят се и се промиват ензимно свързани вторични антитела.
- Добавя се субстрат и се оставя да реагира с ензими.
- Откриват се сигнали и се установява наличието или отсъствието на специфичния антиген в пробата.
При индиректния тест ELISA няколко вторични антитела могат да се свържат с едно първично антитяло. Вторичните антитела са свързани с лесно изследвани ензими. Следователно едно свързване може да направи силен сигнал поради повече от едно взаимодействие. Следователно, индиректният ELISA е по-чувствителен от директния ELISA. Въпреки това, индиректният ELISA може да издава неспецифични сигнали поради кръстосани реакции на вторичните антитела.
Фигура 02: Непряк тест ELISA
Каква е разликата между Direct и Indirect ELISA?
Различна статия Средна преди таблица
Директен срещу индиректен ELISA |
|
| Директният ELISA е по-малко чувствителен в сравнение с индиректния ELISA. | Косвен ELISA е по-чувствителен. |
| Отнема време | |
| Директният тест ELISA е бърз процес. | Непряката ELISA отнема много време. |
| Използване на антитела | |
| Само един тип антитела (първични антитела) се използват при директна ELISA. | Първичните и вторичните антитела се използват за непряка ELISA. |
| Връзка с ензими | |
| Първичните антитела са свързани с ензими. | Вторичните антитела са свързани с ензими. |
| Кръстосана реактивност на втори антитела | |
| Директният ELISA елиминира кръстосаната реактивност на вторите антитела. | Косвен ELISA се влияе от кръстосаната реактивност на вторите антитела. |
| Сигнали | |
| Сигналите са слаби в сравнение с непреки ELISA. | Сигналите се усилват в непряка ELISA. Следователно е лесно да се открие. |
Резюме - Директен срещу индиректен ELISA
ELISA е биохимична техника, използвана главно в имунологията за откриване на присъствието на антитяло или антиген в кръвна проба на пациент. Може да се извърши чрез два процеса, известни като директна или индиректна ELISA. Директният ELISA тест използва само първични антитела за откриване на антигена, докато индиректният ELISA използва както първични, така и вторични антитела. При директния ELISA първичните антитела са маркирани, докато при индиректните ELISA вторичните антитела са маркирани. Това е разликата между директния и индиректния ELISA.
