Ключова разлика - ДНК срещу екстракция на РНК
Изследването на ДНК и РНК са жизненоважни аспекти, за да се разберат основните концепции на молекулярната биология, биотехнологиите и генетиката. Екстракцията на чисти проби от ДНК и РНК са необходими, за да се извършат експериментални процедури по време на тези изследвания. Ключовата разлика между екстракцията на ДНК и РНК е, че процесът на екстракция на ДНК пречиства ДНК, докато екстракцията на РНК пречиства РНК. Процесът на екстракция на ДНК има три различни стъпки: лизис на клетките и катаболизъм на мембранните липиди и протеини, натрупване на катаболити чрез концентриран солен разтвор и утаяване на ДНК с етанол. Процедурата от три стъпки може да се състои от две незадължителни стъпки. Процесът на пречистване на РНК се състои от четири различни етапа: добавяне на гуанидиев тиоцианат за клетъчен лизис, протеинова денатурация, включително рибонуклеази,отделяне на РНК чрез добавяне на хлороформ и фенол и измиване на утайката с етанол.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е екстракция на ДНК
3. Какво е екстракция на РНК
4. Прилики между екстракция на ДНК и РНК
5. Сравнение едно до друго - екстракция на ДНК срещу РНК в таблична форма
6. Резюме
Какво е екстракция на ДНК?
ДНК екстракцията е физичен и химичен процес, който се използва за пречистване на ДНК от проба. Извличането на ДНК е важен аспект в контекста на молекулярната биология и съдебните науки. Процесът е от три основни стъпки. Първоначално трябва да се получат клетките от интерес. След това се улеснява клетъчният лизис, за да се счупи клетъчната мембрана, която отваря клетката и излага цитоплазмата заедно с ДНК. Повърхностноактивни вещества или други детергенти могат да се използват за лизис на липидите от клетъчната мембрана, докато наличните протеини се катаболизират от протеази. Това е незадължителна стъпка. След като клетката бъде лизирана, струпването на катаболизираните молекули се улеснява от концентрирани солеви разтвори. Следва центрофугиране на разтвора, което отделя остатъците от ДНК. На този етапдиференцираната ДНК се смесва с реагентите и солите, използвани по време на клетъчния цикъл.
Фигура 01: Екстракция на ДНК
За да се пречисти допълнително, могат да се използват следните стъпки. Един метод е утаяването с етанол, което включва смесване на ледено студен етанол с отделената ДНК проба. ДНК е неразтворима в алкохол и по този начин произвежда гранули поради агрегирането на ДНК молекули заедно. В този процес се добавя натриев ацетат, за да се повиши степента на утаяване чрез увеличаване на йонната сила. В допълнение към процеса на утаяване с етанол, процесът на екстракция на фенол-хлороформ също може да бъде предизвикан за това. При този метод фенолът денатурира протеините, присъстващи в пробата. Веднъж центрофугирани, денатурираните протеини ще останат в органичната фаза, докато ДНК молекулите, които са смесени с хлороформ, ще присъстват във водната фаза. Хлороформът ще премахне фенолните остатъци. След като екстракцията завърши,ДНК се държи разтворена в TE буфер или ултра чиста вода.
Какво е екстракция на РНК?
Пречистването на РНК е процес, при който РНК се пречиства от биологична проба. Поради наличието на рибонуклеаза в клетките и тъканите, този процес е сложен. Рибонуклеазният ензим има способността да разгражда бързо РНК. Химичната природа на рибонуклеазите е изключително стабилна и е трудно да се инактивират. Неутрализирането на рибонуклеазите е опция. Тъй като този ензим е повсеместен в клетките и тъканите, са разработени специални техники за екстракция на РНК. От многото методи най-често срещаният метод е екстракция с гуанидиний тиоцинат-фенол-хлороформ.
Фигура 02: Екстракция на РНК
Методът на екстракция на гуанидиниев тиоцинат-фенол-хлороформ зависи от центрофугирането и разделянето на фазите. Сместа, която трябва да се центрофугира, се състои от водна проба и наситен с вода разтвор, който се състои от фенол и хлороформ. Веднъж центрофугиран, разтворът се състои от горна водна фаза и долна органична фаза при неутрални условия на рН (рН 7-8). РНК присъства във водната фаза. Органичната фаза обикновено се състои от протеини, разтворени във фенол и липиди, разтворени в хлороформ. Добавя се хаотропен агент (молекула, която има способността да разрушава водородните връзки между водните молекули); това е известно като гуанидиниев тиоцианат. Този агент има способността да денатурира протеини, които включват рибонуклеази, които могат да разграждат РНК и участва в клетъчния лизис. Той също така разделя рРНК от рибозомните протеини. Последният етап от пречистването на РНК е измиване на утаяването на водната фаза с етанол. РНК може да се пречисти и с помощта на течен азот.
Какви са приликите между екстракцията на ДНК и РНК?
- И двата процеса на екстракция използват вредни химикали като фенол и хлороформ.
- Центрофугирането е основна техника и за двата процеса.
- Етанолът се използва за измиване на утайката и за получаване на пречистена ДНК или РНК.
Каква е разликата между екстракцията на ДНК и РНК?
Различна статия Средна преди таблица
ДНК срещу екстракция на РНК |
|
| ДНК екстракцията е процес, който извлича ДНК от организъм или проба. | Екстракцията на РНК е процес, който извлича РНК от проба. |
| Стъпки | |
| Процесът на екстракция на ДНК се състои от три различни стъпки с две незадължителни стъпки. | Процесът на извличане на РНК се състои от четири различни стъпки. |
| Реактиви | |
| За екстракция на ДНК се използват повърхностноактивни вещества, протеази (по избор), алкохол, хлороформ, фенол, натриев ацетат. | За екстракция на РНК се използват гуанидиев тиоцианат, хлороформ, фенол, етанол. |
Резюме - ДНК срещу екстракция на РНК
Екстракцията на ДНК и РНК са жизненоважни аспекти на експерименталните процедури за изследване на молекулярната биология, генетика и биотехнологии. И двата процеса включват подобни реактиви, но при екстракцията на РНК се използва специален реагент, известен като Гуанидиев тиоцианат, който намалява активността на рибонуклеазите. Това е основната разлика между екстракцията на ДНК и РНК.
Изтеглете PDF версия на ДНК срещу екстракция на РНК
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележката към цитата. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между ДНК и РНК екстракция
