Основна разлика - YAC срещу M13 Phage Vector
ДНК клонирането е важен процес, който позволява разпространението на важни ДНК фрагменти от организми. Това изисква свързване на специфична ДНК с векторна ДНК, за да се създаде рекомбинантна ДНК, която се трансформира в организма гостоприемник. Векторът е ДНК молекула, която се държи като средство за пренасяне на чужд генетичен материал в друга клетка или организъм. Той трябва да може да се размножава в организма на гостоприемника и да произвежда множество копия на рекомбинантна ДНК. Съществуват различни видове вектори, използвани при клонирането на ДНК. Две видове изкуствена хромозома (YAC) и М13 фагов вектор са два вида сред тях. Ключовата разлика между YAC и M13 фагов вектор е, че YAC е изкуствена хромозома, която се репликира в дрождни клетки, докато M13 фаговият вектор е едноверижна кръгова ДНК на бактериофаг M13, която се репликира в E Coli клетки.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е YAC
3. Какво е M13 Phage Vector
4. Равно до сравнение - YAC срещу M13 Phage Vector
5. Обобщение
Какво е YAC Vector?
YAC е изкуствено изградена хромозома, която има способността да носи голям сегмент от чужда ДНК и да се репликира в клетките на дрождите. Той има центромери, теломери и автономно репликиращи се последователности, които са от съществено значение за репликацията и стабилността. YAC трябва също да носи селективен маркер или маркери и рестрикционни сайтове, за да го направи ефективен вектор за клониране. Големи последователности, вариращи от 1000 kb до 2000 kb, могат да бъдат вмъкнати в YAC и прехвърлени в дрожди.
Фигура 01: YAC вектор
Какво е M13 Phage Vector?
Бактериофагът M13 е вирус, който заразява и репликира в E Coli. Геномът на бактериофага M13 е с малки размери, около 6,7 kb. Това е едноверижна, кръгова и положителна ДНК. Този вирус специално заразява бактериите E Coli чрез F pilus. След като влезе в ssDNA в бактерията, тя синтезира нейната комплементарна верига и се превръща в dsDNA или репликативна форма (RF) на M13. RF може да се държи като плазмид в организма гостоприемник. DsDNA се репликира в E Coli и произвежда ssDNA, носеща нови фаги. Тези нови фаги се освобождават непрекъснато от Е Coli, без да убиват клетката гостоприемник. Инфекцията обаче забавя растежа на E Coli. dsDNA може да бъде извлечена от бактериални клетки и използвана като вектори при клониране на ДНК. Те са известни като М13 фагови вектори. Те могат лесно да бъдат манипулирани и използвани подобно на плазмидните вектори.
Присъщата способност на инфекцията на тези М13 фаги служи като добра квалификация, която да се използва като вектор при клониране на ген. Когато се развива M13 във вектор, няколко елемента трябва да бъдат включени в неговия геном. Те са, ген за lac репресор (lac I) протеин, оператор-проксималната област на lac Z гена, lac промотор и множество места за клониране (полилинкер). Когато dsDNA на М13 се използва като вектори, тя може да се третира като плазмиден вектор. Използването на ssDNA M13 обаче има предимства в секвенирането на ДНК и насочената към сайта мутагенеза.
Тъй като фаговият вектор М13 носи множество места за клониране в lacZ региона, рекомбинираните вектори могат лесно да бъдат идентифицирани чрез скрининг на синьо / бяла колония върху агарови плаки, съдържащи IPTG и X-Gal. Сините плаки, произведени върху плочите, не съдържат рекомбинираните фаги. Следователно, фаги с вложки могат да бъдат избрани с цел клониране.
Фигура 02: Бактериофаг М13
Каква е разликата между YAC и M13 Phage Vector?
Различна статия Средна преди таблица
YAC срещу M13 Phage Vector |
|
| YAC е генетично конструирана хромозома, която има способността да носи голям сегмент от чужда ДНК и да се репликира в дрождните клетки. | M13 фагов вектор е вирусен вектор, разработен от бактериофаг M13, който се използва за вмъкване на чужда ДНК в E Coli. |
| Предназначение | |
| YACs са проектирани да клонират големи фрагменти от геномна ДНК в дрожди. | М13 фаговите вектори се използват за вмъкване на чужда ДНК в E Coli. |
| Вмъкване на дължина | |
| YAC могат да съдържат геномни вложки с размер на мегабаза (1000 kb - 2000 kb). | Размерът на вложките е около 1500 bps. |
| Строителство | |
| YAC ДНК е трудно да се пречисти непокътната и изисква висока концентрация за генериране на YAC векторна система. | Това се случва чрез циклична фотосинтетична електронна верига. |
| Стабилност | |
| YAC е нестабилен. | M13 фагите могат лесно да бъдат извлечени. |
| Размер | |
| Ензимите са по-големи молекули. | M13 фагите са стабилни от YAC. |
Резюме - YAC срещу M13 Phage Vector
YAC е изкуствено конструирана векторна система, използваща специфична област от хромозома на дрождите, за да вмъкне големи сегменти от генетичен материал в клетките на дрождите. M13 фагов вектор е векторна система, получена от бактериофаг M 13, която използва Е coli като организъм гостоприемник. Това е основната разлика между YAC и M13 Phage Vector. И двете са еднакво полезни в технологията на рекомбинантна ДНК и клонирането на гени.
