Основна разлика - Страница на SDS срещу Родна страница
SDS и нативната страница са два вида техники за електрофореза в полиакриламиден гел, използвани в молекулярната биология. Ключовата разлика между SDS Page и Native Page е видът на използвания полиакриламиден гел. В страницата SDS се използва денатуриращ гел, поради което молекулите се разделят въз основа на тяхното молекулно тегло. За разлика от това в Native Page се използват неденатуриращи гелове. Следователно молекулите се разделят въз основа на техния размер, заряд и форма.
Полиакриламидният гел електрофореза (Страница) използва гел, направен чрез полимеризиране на акриламидни мономери с метилен бисакриламид. Полиакриламидът е по-здрав и по-устойчив на топлина от агарозата. Полиакриламидните гелове имат по-малък размер на порите, което позволява ефективното разделяне на протеините. Има два основни типа настройки на страници, а именно SDS Page и Native Page. SDS Page или натриево-додецилсулфатен полиакриламиден гел електрофореза разделя протеините на базата на тяхното молекулно тегло. Денатуриращите гелове се използват в SDS Page. Native Page използва неденатуриращи гелове и разделя протеините въз основа на техния размер, заряд и форма (3D конформация).
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е Страница за безопасност
3. Какво е Родна страница
4. Прилики между Страницата за безопасност и Основна страница
5. Равно до сравнение - Страница за безопасност срещу Основна страница в таблична форма
6. Резюме
Какво е SDS страница?
SDS Page е най-често срещаната електрофоретична техника, използвана за разделяне на протеини въз основа на тяхното молекулно тегло. Гелът се получава чрез добавяне на SDS (натриев додецил сулфат), който е детергент. SDS протезира протеини в мономери. SDS е анионен детергент. Следователно, той добавя нетен отрицателен заряд към протеините в широк диапазон на pH. Когато нетният отрицателен заряд се придаде на протеиновите молекули, поради вариацията на заряда, сложните структури се разграждат. Поради отрицателния заряд протеините се привличат към положителния край. По този начин молекулите с по-ниско молекулно тегло се движат по-бързо върху матрицата на гела и могат да се наблюдават близо до анода, докато протеините с по-високо молекулно тегло се наблюдават по-близо до ямките.
Фигура 01: Страница на SDS
Свързването на SDS с полипептидната верига е пропорционално на нейната относителна молекулна маса. Следователно, молекулната маса може да бъде определена и чрез SDS Page. Оцветяването на SDS Page геловете се извършва чрез оцветяване с бромофенолно синьо. Приложенията на SDS страницата варират в по-голяма степен, когато тя може да се използва за оценка на относителната молекулна маса и за определяне на относителното изобилие на протеини в протеинова смес. Страницата SDS може също да се използва за определяне на разпределението на протеини в смес от протеини. SDS Page се прилага и за пречистване и оценка на протеини. Използва се като предварителна процедура за уестърн блотинг и хибридизация, която от своя страна се използва за картографиране и идентификация на протеини.
Какво е Native Page?
Електрофорезата в естествения полиакриламиден гел (Native Page) използва неденатуриращ гел. Следователно, SDS или друг денатуриращ агент не се добавя към матрицата на гела. В Native Page разделянето на протеините се основава на заряда и размера на протеина. Следователно подвижността на протеина зависи от заряда и размера на протеина.
Зарядът на протеина зависи от страничните вериги на аминокиселините. Ако страничните вериги са отрицателно заредени, протеинът ще получи общ отрицателен заряд и обратно. Протеините запазват 3D конформация поради сгъването, което се извършва. Сгъването е резултат от няколко типа връзки в протеини като дисулфидни връзки, хидрофобни взаимодействия и водородни връзки. Следователно, ако естествената страница се носи при неутрално рН, протеините ще бъдат разделени според молекулната форма на протеина. Следователно Native Page може да се използва като чувствителна техника за откриване на промяната в заряда или конформацията на протеина.
Основното предимство на естествената страница е, че протеинът, използван за анализ на Page, може да бъде възстановен в първоначалното си състояние след анализа на Page, тъй като протеинът не се нарушава по време на процеса. Native Page е относително висока пропускателна техника и стабилността на протеина се увеличава.
Фигура 02: Родна страница
След завършване на гел гена, Native Page гелът може да се види чрез оцветяване с бромофенолово синьо или друг подходящ реагент за оцветяване. Приложенията на Native Page включват разделяне на кисели протеини, включително гликопротеини като човешки рекомбинантен еритропоетин или идентифициране на протеини, присъстващи в говежди серумен албумин (BSA).
Какви са приликите между Страницата на SDS и Родната страница?
- Както системите SDS Page, така и Native Page използват полиакриламиден гел като матрица на гела.
- И двете се използват за разделяне и идентифициране на протеини.
- И двамата използват електрофоретична подвижност, за да разделят съединенията.
- И двете могат да бъдат направени по вертикален или хоризонтален начин (най-вече като вертикални настройки на Страницата, тъй като дължината на изпълнение е по-голяма).
- Апаратът за електрофореза, включващ резервоара за гел, гребените, захранването е необходим за работата на двете техники.
- Визуализирането на гела може да се извърши чрез методи на оцветяване и в двете техники.
Каква е разликата между страницата за безопасност и основната страница?
Различна статия Средна преди таблица
Страница на SDS срещу родна страница |
|
| Страницата SDS или страницата натриев додецил сулфат разделя протеините въз основа на тяхното молекулно тегло и използва денатуриращ гел. | Native Page използва неденатуриращи гелове и разделя протеините въз основа на техния размер, заряд и форма (3D конформация). |
| Тип гел | |
| В SDS-страницата се използва денатуриращ гел. | В родната страница се използва неденатуриращ гел. |
| Наличие на SDS | |
| SDS присъства като детергент за придаване на отрицателен заряд върху пробата на страницата на SDS. | SDS не присъства в родната страница. |
| Основа за разделяне | |
| Разделянето на протеините зависи от молекулното тегло на протеина в страницата на SDS. | Разделянето зависи от размера и формата на протеиновата молекула в родната страница. |
| Стабилност на протеина | |
| Стабилността на протеина е ниска в SDS страницата. | Стабилността на протеините е висока в родната страница. |
| Възстановяване на оригиналния протеин | |
| Не е възможно, тъй като е денатуриран в SDS страницата. | Възможно на родната страница. |
Резюме - Страница на SDS срещу родна страница
SDS Page и Native Page са два вида техники за електрофореза в полиакриламиден гел, използвани за разделяне на протеини. Страницата SDS се третира с препарат, наречен SDS. SDS придава цялостен отрицателен заряд на протеина, което след това води до денатурация на протеина. Следователно протеините се разделят въз основа на тяхното молекулно тегло. За разлика от това техниката на Native Page не използва никакъв денатуриращ агент. По този начин протеините се разделят или въз основа на техния размер или форма. Това е разликата между SDS страница и родна страница.
