Ключова разлика - SDS Page срещу Western Blot
Уестърн блотингът е техника, която открива специфичен протеин от протеинова проба. Тази техника се извършва чрез няколко ключови стъпки: гел електрофореза, попиване и хибридизация. Натриевият додецил сулфат полиакриламиден гел електрофореза (SDS Page) е вид техника на гел електрофореза, която се използва за разделяне на протеини според техните размери (молекулни тегла). Western blot е специален лист от попиваща мембрана, който се използва за прехвърляне на същия модел на протеините в SDS Page. Ключовата разлика между SDS Page и Western blot е, че SDS Page позволява разделянето на протеини в смес, докато Western blot позволява откриване и количествено определяне на специфичен протеин от смес. И двете са полезни при проучвания за анализ на протеини.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е SDS страница
3. Какво е Western Blot
4. Сравнение едно до друго - SDS страница срещу Western Blot
5. Резюме
Какво е SDS страница?
SDS Page е техника за гел електрофореза, използвана за разделяне на протеини. Често се използва в биохимията, генетиката, криминалистиката и молекулярната биология. След като протеините се извлекат от пробата, те се пускат върху гел, съставен от SDS и полиакриламид. SDS е анионен детергент, който се използва за линеаризиране на протеини (денатуриращи протеини) и за придаване на отрицателен заряд на линеаризирани протеини, пропорционални на тяхната молекулна маса. Полиакриламидът се превръща в твърдата опора за гела. Денатурираните протеини, които са отрицателно заредени, мигрират към положителния край на апарата през гела. Според размерите на протеините, мигриращите скорости се различават при протеините и настъпва разделяне. Следователно, SDS страницата е полезна за разделяне на отделни протеини въз основа на техните размери.
Приготвянето на полиакриламиден гел за фракциониране на протеини е решаваща стъпка в SDS Page. Правилната концентрация на полиакриламид и видът на използвания омрежващ агент силно влияят върху физическите свойства на гела, което прави действителното разделяне на различните протеини. Размерите на порите на гела трябва да се управляват правилно за ефективно разделяне. Въпреки това, SDS Page се счита за техника за разделяне на протеини с висока разделителна способност.
Техниката SDS Page има основно ограничение в анализа на протеините. Тъй като SDS денатурира протеини преди разделянето, той не позволява откриване на ензимна активност, взаимодействия с протеини, свързващи протеини, кофактори и др.
Фигура 01: Страница на SDS
Какво е Western Blot?
Техниката на Western blot позволява да се открие специфичен протеин от протеинова смес и да се измери количеството и молекулното тегло на протеина. Western blot е мембраната, използвана по време на процедурата за попиване, за да се получи огледален образ на протеиновите шарки в SDS-полиакриламидния гел. Мембраната, която се използва за уестърн блотинг, се състои предимно от нитроцелулоза или поливинилиден дифлуорид (PVDF). Мембраната с прехвърления протеин може да се използва за идентифициране на желания протеин. Изисква висококачествено антитяло за откриване на желания протеин чрез хибридизация. Антитялото се свързва със специфичния си антиген и разкрива присъствието на желания антиген, който е протеин.
Прехвърлянето на протеините от полиакриламидния гел на SDS към Western blot се извършва чрез електроблотинг. Това е ефективен и бърз метод, който кара протеините да електрофорезират от гела и да преминат върху нитроцелулозната мембрана (уестърн блот).
Фигура 02: Западно петно
Каква е разликата между SDS Page и Western Blot?
Различна статия Средна преди таблица
SDS Page срещу Western Blot |
|
| SDS Page е техника на гел електрофореза. | Western blot е техника, която се извършва върху мембрана за откриване на специфичен протеин от смес. |
| Използвайте | |
| Страницата SDS позволява разделяне на протеините според техните размери. | Western blot позволява прехвърлянето на протеини върху SDS страничния гел без промяна на неговия модел и позволява хибридизация със специфични антитела. |
| Недостатъци | |
| Денатурацията на протеини, високата цена и наличието на невротоксинни химикали са недостатъците на тази техника. | Тази техника отнема много време и изисква добри опитни лични и специфични контролирани условия. |
Резюме - SDS страница срещу Western Blot
Страницата на SDS и Western blot са два метода, участващи в анализа на протеините. Страницата SDS позволява лесно разделяне на протеини върху гел според тяхното молекулно тегло. Western blot помага да се потвърди наличието и количеството на специфичен протеин чрез хибридизация със специфични антитела. Това е разликата между SDS Page и Western blot.
