Ключова разлика - T4 срещу T7 DNA Ligase
ДНК лигазата е важен ензим, използван в техниките на молекулярната биология. Той функционира като молекулярно лепило за свързване на нуклеотиди чрез образуване на фосфодиестерни връзки между нуклеотидите. Фосфодиестерните връзки се образуват между 3 'хидроксилния край на захарната част и 5' крайната фосфатна група. ДНК лигазата е жизненоважна в процеса на репликация, за да се присъедини към Okazaki фрагментите на изоставащата верига и по време на механизмите за възстановяване на ДНК и експериментите за клониране in vitro, за да се присъедини към желания ген от интерес за векторния геном. Има две основни ДНК лигази, използвани в момента от молекулярните биолози: Т4 и Т7 ДНК лигази. Т4 ДНК лигазата е един от първите ензими, изолирани от Т4 бактериофага. T7 ДНК лигазата, която е по-малък протеин, е ензим, изолиран от T7 бактериофаг. Това е ключовата разлика между Т4 и Т7 ДНК лигази.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е действието на ДНК лигаза
3. Какво е Т4 ДНК лигаза
4. Какво е Т7 ДНК лигаза
4. Прилики между Т4 и Т7 ДНК лигаза
5. Равно до сравнение - T4 срещу T7 ДНК лигаза в таблична форма
6. Резюме
Какво е действието на ДНК лигазата?
ДНК лигирането се осъществява в тристепенна реакция. Първата стъпка е нуклеофилна атака върху алфа-фосфора на АТР, генерирайки ковалентен ензим-аденилатен междинен продукт, в който АМР е свързан с азота на крайната странична верига на лизина. Във втория етап се появява нуклеофилна атака върху фосфора на ензима-аденилат от 5'-фосфатно завършения ДНК субстрат, освобождавайки лизин и образувайки ДНК-аденилат. В последния етап ДНК-аденилатът се атакува от 3'-OH на друга ДНК верига, освобождавайки AMP и се присъединява към полинуклеотидите.
Какво е Т4 ДНК лигаза?
T4 Ligase е първата лигаза, изолирана и идентифицирана от Meselson, Weigle и Kellenberger и е първата по рода си произведена лигаза. T4 ДНК лигазата е АТР-зависим ензим, който катализира образуването на фосфодиестерна връзка. Това е единична полипептидна верига с 487 аминокиселинни остатъка и има молекулно тегло около 77 kDa. Оптималното рН за неговата активност е в диапазона от 7,5 - 8.
Фигура 01: Т4 ДНК лигаза
Т4 ДНК лигаза, както подсказва името му, присъства в бактериофага Т4 и е изолирана, когато фагът произвежда ензима при инфекция с Е. coli. Ензимните лигати двуверижни ДНК дуплекси с тъпи краища и фрагментите, които трябва да бъдат свързани, трябва да са в непосредствена близост един до друг.
Какво представлява Т7 ДНК лигазата?
T7 лигазата е 41 kDa протеин, произведен от T7 бактериофаг и се изолира чрез заразяване на клетките на E. coli. Основната функция на Т7 лигазата е да лигира ДНК дуплекси чрез фосфодиестерни връзки и да се присъедини към близките фрагменти от ДНК по време на експерименти с клониране. Оптималното рН за T7 ДНК лигаза е в диапазона от 7,0 - 7,2. Т7 лигазата зависи от АТР. ДНК лигазите T7 също са способни да отгряват ДНК и РНК хибриди, което води до анормални конформации по време на транскрипция; това явление обаче все още се изследва чрез in vitro проучвания.
Какви са приликите между ДНК лигазата на Т4 и Т7?
- ДНК лигазата T4 и T7 участва в реакция на лигиране чрез отгряване на ДНК дуплекси чрез образуване на фосфодиестерна връзка между 3 'OH края и 5' фосфатния край на ДНК фрагмента.
- И двата ензима лигират тъпо завършени ДНК дуплекси, които са в непосредствена близост един до друг.
- И двата ензима са зависими от АТФ.
- Тези ензими се изолират чрез заразяване на клетките на Е. coli с конкретния бактериофаг.
-
Приложенията на двата ензима включват:
- Молекулярно клониране - за лигиране на гена от интерес към вектора
- ДНК поправка - за поправяне на двуверижни ниши
- Репликация на ДНК in vitro
- Лигазна верижна реакция
Каква е разликата между ДНК лигазата на Т4 и Т7?
Различна статия Средна преди таблица
T4 срещу T7 DNA лигаза |
|
| T4 DNA Ligase тип ДНК лигаза, изолиран от бактериофага T4 и участва в лигирането на съседни ДНК фрагменти чрез образуване на фосфодиестерна връзка. | T7 DNA Ligase тип ДНК лигаза, изолиран от бактериофага T7 и участва в лигирането на съседни ДНК фрагменти чрез образуване на фосфодиестерна връзка. |
| Размер на протеина | |
| Размерът на Т4 ДНК лигазата е 77 kDa - по-голям в сравнение с Т7 ДНК лигазата. | Размерът на T7 ДНК лигазата е 41 kDa. |
| Оптимално рН | |
| Диапазонът на рН, който работи T4 ДНК лигазата е 7,5 - 8,0. | Диапазонът на рН, който работи T7 ДНК лигазата е 7,0 - 7,2. |
Резюме - T4 срещу T7 DNA лигаза
ДНК лигазите са важен клас ензими, участващи в молекулярното клониране за получаване на рекомбинантни ДНК молекули, съдържащи гена от интерес. Реакцията на лигиране е реакция, използваща енергия и текат нови изследователски проучвания за подобряване на точността чрез модулиране на наличните лигази. ДНК лигазите T4 и T7 са два вида важни ДНК лигазни ензими, използвани в молекулярно-биологичните техники. T7 ДНК лигазата също е резултат от изследване, което се основава на първичната лигаза, изолирана от заразена с T4 Е. coli. T7 е представен с по-голяма ефективност и точност при изпълнение на функциите си поради по-малкия си размер. Това е разликата между Т4 и Т7 лигаза.
Изтеглете PDF версия на T4 срещу T7 DNA Ligase
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележките към цитата. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между T4 и T7 Ligase.
