Ключова разлика - Бензоназа срещу DNase
Разграждането на нуклеиновите киселини е важно за много техники на молекулярната биология. Той се използва широко в рекомбинантната ДНК технология, за да се отърве от нежеланите фрагменти от ДНК и РНК. Разграждащите нуклеиновата киселина ензими се наричат Нуклеази и те могат да бъдат от различни типове въз основа на необходимата функция. Нуклеазите, които разграждат ДНК, са известни като DNases, докато тези, които разграждат РНК, са известни RNases. Тези ензими се използват най-вече при in vitro експерименти, където се провеждат in vitro молекулярни тестове за изолиране на чиста ДНК, РНК или протеини. Бензоназите са вид нуклеази, които разграждат както ДНК, така и РНК, докато ДНКазите разграждат само ДНК. Това е ключовата разлика между бензоназата и DNase.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е бензоназа
3. Какво е DNase
4. Прилики между бензоназа и DNase
5. Сравнение едно до друго - Benzonase срещу DNase в таблична форма
6. Резюме
Какво представлява бензоназата?
Бензоназата е генно инженерна ендонуклеаза от Serratia marcescens. Този ензим се произвежда в гостоприемници на Е. coli в промишлен мащаб. Бензоназата е способна да разцепва двуверижна ДНК, линейна ДНК, кръгова ДНК и едноверижна РНК. По този начин бензоназата е от търговско значение. Бензоназният ензим е протеинов димер, който има 245 идентични аминокиселини, ~ 30 kDa субединици с две основни дисулфидни връзки. Бензоназата разцепва нуклеиновите киселини в своя 5 'край и води до фрагменти със свободни 5' краища. Бензоназата може да разцепва нуклеинови киселини при всяка последователност, но предпочита богати на GC региони.
Бензоназата се съхранява при -20 0 C. Оптималното рН за ензимната активност е 8,0 - 9,2. Приложенията на Benzonase включват подготовка на проби за протеинова 2D гел електрофореза, където Benzonase премахва свързаните нуклеинови киселини и отстраняване на замърсители на нуклеинови киселини от рекомбинантни протеинови препарати. Използва се също за намаляване на вискозитета на протеиновите екстракти и предотвратяване на натрупването на клетки в клетъчна смес.
Какво представлява DNase?
DNase е нуклеаза, хидролитичен ензим, който е способен само да разцепва двуверижна ДНК. Има два основни типа DNases: DNase I и DNase II. DNase I участва в разцепването на двуверижна ДНК за получаване на полинуклеотиди с 5 'свободни краища. DNase II участва в разцепването на двуверижна ДНК за получаване на полинуклеотидни нишки с 3 'свободни краища или надвеси.
DNase I
DNase I функционира при оптимално рН между 7,0 - 8,0. Ензимната активност зависи от много йонни кофактори, които включват, Ca 2+, Mg 2+ или Mn 2+. Активността на Mg 2+ и Mn 2+ решава функцията на DNase I. В присъствието на Mg 2+, DNase I разцепва всяка верига на dsDNA независимо. Това става по случаен начин. За разлика от това, в присъствието на Mn 2+, ензимът разцепва и двете ДНК вериги на приблизително едно и също място. Това разцепване ще доведе до получаване на два вида ДНК фрагменти; един тип с тъпи краища и друг тип с един или два нуклеотидни надвисания.
Фигура 02: DNase
DNase II
DNase II функционира при оптимално рН 4,5-5,0 и за неговата активност са необходими двувалентни метални йони, подобно на DNase I. Известно е, че механизмът на DNase II се състои от три основни стъпки.
- В рамките на ДНК гръбнака се индуцират множество едноверижни прекъсвания.
- Произвеждат се киселинно разтворими нуклеотиди и олигонуклеотиди.
- Нелинейното хиперхромно изместване настъпва в последната фаза.
Основните инхибитори на ензима DNase включват метални хелатори, преходни метали и химикали като натриев додецил сулфат и β - меркаптоетанол.
Основните приложения на DNase включват приготвяне на без ДНК екстракти от РНК и протеинови екстракти и отстраняване на шаблонна ДНК по време на експериментите за транскрипция in vitro.
Какви са приликите между бензоназата и DNase?
- И двете са хидролитични ензими.
- И двете са нуклеази.
- И двамата участват чрез разцепване на фосфодиестерните връзки на нуклеиновите киселини.
- И двете изискват оптимално рН и температури на съхранение, за да поддържат активността на ензима.
- Инхибиторите на ензимите включват хелатообразуващи агенти, преходни метали и детергентни химикали.
- Приложенията са насочени главно към получаване на екстракти от ДНК, РНК и протеини с висока чистота.
- И двата ензима могат да бъдат произведени чрез генно инженерство.
Каква е разликата между бензоназа и DNase?
Различна статия Средна преди таблица
Бензоназа срещу DNase |
|
| Бензоназата е ензим, който е способен да разцепва двуверижна ДНК, линейна ДНК, кръгова ДНК и РНК. | DNase е ензим, който е способен да разцепва двуверижна ДНК. |
| Субстрат за ензима | |
| ДНК и РНК са субстрати за бензоназата. | ДНК е субстратът за DNase. |
| Структура | |
| Оптималният диапазон на рН на бензоназата е 7,0 -8,0 | Оптималните граници на pH на DNase I са 7.0 - 8.0 и DNase II са 4.5 - 5.0. |
Резюме - Benzonase срещу DNase
Нуклеазните ензими се използват широко в различни експериментални процедури по отношение на молекулярната биология и генното инженерство. Бензоназата и DNase са два вида нуклеази. Бензоназата участва в разграждането както на ДНК, така и на РНК, докато DNase участва в разцепването на двуверижна ДНК. Това е основната разлика между бензоназата и DNase. Понастоящем и двата типа нуклеази се произвеждат чрез рекомбинантна ДНК технология, която дава ензими с по-високо качество, които са оптимизирани за максимално производство.
Изтеглете PDF версия на Benzonase срещу DNase
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележката към цитата. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между бензоназа и DNase
