Ключова разлика - Phusion срещу Taq полимераза
ДНК полимеразите са широко използвани ензими в техниките за молекулярна биология и също присъстват естествено във всички организми, които се подлагат на репликация на ДНК. Те са ключовите полимеризиращи ензими, които включват по време на репликацията. ДНК полимеразата е способна да добавя нуклеотиди към свободния 3 'край на ДНК веригата, като по този начин причинява удължаване на нова верига. Понастоящем поради развитието на молекулярната биология в диагностиката на болестите и промишленото приложение е важно да се произвеждат полимерази с различни полезни свойства. Това увеличава точността на метода и го прави по-бърза техника. Phusion и Taq полимераза са два комерсиално произведени термостабилни полимеразни ензима, които се използват в специални молекулярни приложения. Фузият е ДНК полимераза, изолирана от Pyrococcus furiosus и се използва главно в експерименти с клониране, за да се увеличи точността. Taq ДНК полимераза е стандартната ДНК полимераза, използвана във верижната реакция на полимеразата (PCR), и е изолирана от термостабилната бактерия; Thermus aquaticus. Ключовата разлика между двата ензима е микроорганизмът източник. Фузия се изолира от екстремофила, Pyrococcus furiosus, докато Taq полимеразата се изолира от термофила, Thermus aquaticus. Taq полимераза се изолира от термофила, Thermus aquaticus. Taq полимеразата се изолира от термофила, Thermus aquaticus.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е Phusion
3. Какво е Taq полимераза
4. Прилики между Phusion и Taq полимераза
5. Равно до сравнение - Phusion срещу Taq полимераза в таблична форма
6. Резюме
Какво представлява Phusion?
Фузионната ДНК полимераза е нова полимераза, която се произвежда чрез изолиране на ензима от Pyrococcus furiosus, който е екстремофилна архея. Тези микроби се намират в условия на изключително висока температура, като по този начин правят полимеразата силно термостабилна полимераза. Фузионната полимераза се използва за постигане на изключителна точност спрямо конвенционалната термостабилна полимераза; Taq полимераза. Фузионната полимераза е способна да усилва дълги шаблони до 7.5kb геномна ДНК. Оптималният капацитет на полимеризация на Phusion полимераза е при 72 0 C. Phusion се използва също и в продукти за клониране за секвениране, експресионен анализ и мутационен анализ.
Фузионната ДНК полимераза има 3 '- 5' екзонуклеазна активност. Това позволява корекция на новосинтезираната верига след синтеза. Следователно несъответствията на нуклеотидите лесно се поправят. По този начин има по-малък процент грешки. Общите предимства на Phusion полимеразата са;
- Изключителна вярност
- Висока скорост и намалено време за удължаване
- Здрави реакции и изисква минимална оптимизация
- Висок добив
Фигура 01: Фузия
Основният недостатък на Phusion полимеразата е, че тя се инхибира в присъствието на дезоксиуридин трифосфат (dUTP). Когато dUTP се натрупват в реакционната смес, това може да инхибира действията на Phusion полимераза. Това се предотвратява чрез третиране на реакционната смес с dUTPase преди добавяне на ензима. Понастоящем, устойчив на dUTP вариант на Phusion полимераза, известен като Pfu Turbo, се използва вместо Phusion полимераза като средство за отстраняване на този проблем.
Какво е Taq полимераза?
Изобретението на Taq ДНК полимераза революционизира областта на молекулярната биология. Той реши основен проблем в амплификацията на ДНК. Taq ДНК полимераза е термостабилен полимеразен ензим, извлечен и изолиран от термофилната бактерия, Thermus aquaticus. Откриването на тези ензими води до развитието на PCR. Този ензим позволява използването на полимеразна верижна реакция при усилване на ДНК вместо конвенционалните трудоемки техники на клониране. PCR сега се използва в молекулярната диагностика, селското стопанство и промишлеността с много нови варианти, добавени към техниката.
Фигура 02: Taq полимераза
Taq ДНК полимеразата функционира при оптимален температурен диапазон между 72 0 C - 80 0 C. Taq ДНК полимеразата изисква съ-фактор; магнезий за неговата функция. Taq полимеразата няма способността за корекция на 3 '- 5', следователно процентът на грешки на Taq ДНК полимеразата е висок в сравнение с по-новите видове ДНК полимерази като Phusion полимераза и т.н. Но популярността на Taq ДНК полимераза остава същото в целия свят на науката поради удобството и гъвкавостта на ензима.
Какви са приликите между Phusion и Taq полимераза?
- Както ензимите Phusion, така и Taq полимеразата са полимеризиращи ензими, които са способни да добавят нуклеотиди към 3 'свободния край на ДНК веригата.
- Както Phusion, така и Taq полимеразите изискват праймерна последователност, за да инициират полимеризация.
- Както Phusion, така и Taq полимеразите са топлоустойчиви.
- Както Phusion, така и Taq полимеразите се използват в PCR механизмите за амплифициране на ДНК.
- Когато се добавя полимеразата към реакционната смес, както Phusion, така и Taq полимеразите се добавят последни, за да се гарантира ефективността на ензима.
- Както Phusion, така и Taq полимеразите се комерсиално синтезират за експериментални цели на молекулярната биология.
- Както Phusion, така и Taq полимеразите изискват кофактор, за да завършат своята функция.
Каква е разликата между Phusion и Taq полимераза?
Различна статия Средна преди таблица
Фузия срещу Taq полимераза |
|
| Фузият е ДНК полимераза, изолирана от Pyrococcus furiosus и се използва главно в експерименти с клониране, за да се увеличи точността. | Taq ДНК полимераза е стандартната ДНК полимераза, използвана в полимеразната верижна реакция (PCR), и е изолирана от термостабилната бактерия, Thermus aquaticus. |
| Източник Организъм | |
| Фузия се извлича от екстремофилни археи - Pyrococcus furiosus. | Тези литературни произведения обхващат периода на колонизация до периода на деколонизация. |
| Възможност за коректно четене | |
| 3 '- 5' доказателствена способност за четене присъства в Phusion. | 3 '- 5' доказателствена способност за четене липсва в Taq полимеразата. |
| Верност | |
| Високата вярност е налице при Phusion. | Taq полимеразата показва ниска точност. |
| Усилване | |
| Phusion е способен да усилва дълги ДНК фрагменти. | Taq полимеразата е способна да усилва много по-къси ДНК фрагменти. |
| dUTP Отравяне | |
| Фузионното действие се инхибира от натрупването на странно. | Taq полимеразата не се инхибира от dUPT. |
Резюме - Phusion срещу Taq полимераза
Phusion и Taq ДНК полимераза са две термоустойчиви полимерази, които се използват в PCR техниките. Фузия е полимераза, изолирана от екстремофила, Pyrococcus furiosus, докато Taq е изолирана от термостабилните бактерии Thermus aquaticus. Откриването на Taq ДНК полимераза води до PCR изобретението. Phusion има много предимства пред Taq, което прави Phusion по-добър вариант за получаване на ДНК с висока точност. Въпреки това, Taq полимеразата все още се използва като стандартен полимеразен ензим в PCR. Това е разликата между Phusion и Taq полимераза.
