Разлика между северното южно и западното петно

2024 Автор: Mildred Bawerman | [email protected]. Последно модифициран: 2023-12-16 08:37

Ключова разлика - Северно срещу Южно срещу Западно петно

Откриването на специфични последователности на ДНК, РНК и протеини е от съществено значение за различни видове изследвания в молекулярната биология. Гелната електрофореза е техника, която разделя ДНК, РНК и протеини според техните размери. От гелните профили, специфична ДНК последователност, РНК последователност или протеин се откриват чрез специалните техники, наречени блотиране и хибридизация с маркирани сонди. Има три различни вида попивателни методи, а именно южен, северен и западен. Ключовата разлика между северното южно и западното попиване се крие в типа на молекулата, която тя открива от проба. Саутерн блотинг е метод, който открива специфична ДНК последователност от ДНК проба. Северното блотиране е техника, която открива специфична РНК последователност от РНК проба. Western blot е метод, който открива специфичен протеин от протеинова проба.

СЪДЪРЖАНИЕ

1. Общ преглед и ключова разлика

2. Какво е южно петно

3. Какво е северно петно

4. Какво е западно петно

5. Сравнение рамо до рамо - Северно срещу Южно срещу Западно петно

6. Резюме

Какво представлява Южното петно?

Техниката на Southern blot е разработена от EM Southern през 1975 г. за идентифициране на специфична ДНК последователност от ДНК проба. Това е първата попиваща техника, въведена в молекулярната биология. Той даде възможност за откриване на специфични гени от ДНК, специфични фрагменти от ДНК и т.н. Има няколко стъпки, участващи в техниката на ютър-блотинг. Те са както следва.

1. ДНК се изолира от пробата и се усвоява с рестрикционни ендонуклеази.
2. Разградената проба се отделя чрез електрофореза в агарозен гел.
3. ДНК фрагментите в гела се денатурират в единични вериги чрез използване на алкален разтвор.
4. Едноверижната ДНК се прехвърля към нитроцелулозна филтърна мембрана чрез капилярен трансфер.
5. Прехвърлената ДНК се фиксира за постоянно върху мембраната.
6. Фиксираната ДНК на мембраната се хибридизира с маркирани сонди.
7. Несвързаната ДНК се отмива от мембраната чрез измиване.
8. Рентгеновият филм се излага на мембраната и се приготвя авторадиограф.

Саутерн блотинг се прилага за различни аспекти на молекулярната биология. Полезен е при RFLP картографиране, криминалистични изследвания, метилиране на ДНК в генната експресия, откриване на мутирали гени при генетични нарушения, отпечатване на ДНК и т.н.

Фигура 01: Техника на южно петно

Какво е Северно петно?

Northern blot е метод, предназначен за откриване на специфична РНК последователност или иРНК последователност от проба за изследване на генната експресия. Тази техника е разработена от Alwine, Kemp и Stark през 1979 г. Тя се различава от техниките за северно и западно попиване поради няколко стъпки. Тази техника обаче се извършва и чрез гел електрофореза, попиване и хибридизация със специфично маркирани сонди и откриване. Техниката на северно попиване се извършва, както следва.

1. РНК се извлича от пробата и се отделя чрез гел електрофореза.
2. РНК се прехвърля от гела върху попиваща мембрана и се фиксира.
3. Мембраната се третира с маркирана сонда, приготвена от кДНК или РНК (сондата допълва определена последователност в пробата).
4. Сондата се инкубира с мембраната, за да се свърже със специфична последователност.
5. Несвързаните сонди се измиват.
6. Хибридизирани фрагменти се откриват с авторадиограф.

Северното блотиране е важен инструмент за откриване и количествено определяне на хибридизираната иРНК, изучаване на деградацията на РНК, оценка на полуживота на РНК, откриване на снаждане на РНК, изследване на генната експресия и др.

Фигура 02: Северно петно

Какво е Western Blotting?

Уестърн блотингът е метод за откриване на специфичен протеин от протеинова смес чрез използването на маркирано антитяло. Следователно, Western blot е известен още като имуноблот. Тази техника е въведена от Towbin et al през 1979 г. и сега тя се извършва рутинно в лабораториите за анализ на протеини. Стъпките са както следва.

1. Протеините се извличат от пробата
2. Протеините се разделят по техните размери, като се използва електрофореза в полиакриламиден гел
3. Отделените молекули се прехвърлят в PVDF мембрана или нитроцелулозна мембрана чрез електропорация
4. Мембраната е блокирана за неспецифично свързване с антителата
5. Прехвърлените протеини се свързват с първично антитяло (белязани с ензими антитела).
6. Мембраната се измива, за да се отстранят неспецифично свързани първични антитела
7. Свързаните антитела се откриват чрез добавяне на субстрат и откриване на образуваната цветна утайка

Уестърн блотингът е полезен при откриването на антитела срещу ХИВ в проба от човешки серум. Western blot може също да се използва като потвърдителен тест за инфекция с хепатит В и окончателен тест за болест на луда крава.

Фигура 03: Western Blotting

Каква е разликата между Северното Южно и Западното петно?

Различна статия Средна преди таблица

Северно срещу Южно срещу Западно петно
Тип на откритата молекула
Северно петно	Северното попиване открива специфична РНК последователност от РНК проба.
Южно петно	Саутерн блотинг открива специфична ДНК последователност от ДНК проба.
Западно петно	Western blotting открива специфичен протеин от протеинова проба.
Тип гел
Северно петно	Това използва агароза / формалдехиден гел.
Южно петно	Това използва Agarose гел.
Западно петно	Това използва полиакриламиден гел.
Метод за пеене
Северно петно	Това е капилярен трансфер.
Южно петно	Това е капилярен трансфер.
Западно петно	Това е електрически трансфер.
Използвани сонди
Северно петно	кДНК или РНК сонди, маркирани радиоактивно или нерадиоактивно.
Южно петно	ДНК сондите са етикетирани радиоактивно или нерадиоактивно.
Западно петно	Първичните антитела се използват като сонди.
Система за откриване
Северно петно	Това се прави с помощта на авторадиограф или откриване на промяна на светлината или цвета.
Южно петно	Това се прави с помощта на авторадиограф, откриване на промяна на светлината или цвета.
Западно петно	Това се прави с помощта на откриване на промяна на светлината или цвета.

Обобщение - Северно срещу Южно срещу Западно петно

Блотингът е специална техника, разработена за идентифициране на специфична ДНК, РНК или протеин от пробите. Има три отделни попивателни процедури, а именно северна, южна и западна, за откриване на специфичен тип молекула. Техниката на Northern blot е предназначена за откриване на специфична РНК последователност от смес от РНК. Техниката на Southern blot позволява откриването на специфична ДНК последователност от ДНК проба, а техниката Western blotting е разработена за идентифициране на специфичен протеин от протеинова смес.