Разлика между Nick Translation и Primer Extension

2024 Автор: Mildred Bawerman | [email protected]. Последно модифициран: 2023-12-16 08:37

Ключова разлика - Превод на Ник срещу Разширение на Primer

Преводът на ник и удължаването на праймера са две важни техники, изпълнявани в молекулярната биология. Ключовата разлика между ник транслацията и удължаването на праймера е, че процесът на ник транслация произвежда маркирани сонди за други техники на хибридизация, докато методът на удължаване на праймера идентифицира специфична РНК последователност от смес и разкрива информация за експресията на иРНК. И двете техники имат голямо значение и се извършват рутинно в лаборатории за молекулярни изследвания.

СЪДЪРЖАНИЕ

1. Общ преглед и ключова разлика

2. Какво е превод на Nick

3. Какво е разширение на праймера

4. Сравнение едно до друго - превод на Nick срещу разширение на праймера

5. Обобщение

Какво е Nick Translation?

Преводът на Ник е важна техника, използвана за приготвяне на маркирани сонди за различни молекулярно-биологични техники като блотиране, in situ хибридизация, флуоресцентна in situ хибридизация и др. Това е in vitro метод за маркиране на ДНК. ДНК сондите се използват за идентифициране на специфични ДНК или РНК последователности. С помощта на маркирана сонда могат да се маркират или визуализират специфични фрагменти от сложна смес от нуклеинова киселина. Следователно, маркираните сонди се приготвят с помощта на различни техники, които да се използват за различни техники. Преводът на Ник е един такъв метод, който произвежда маркирани сонди с помощта на ензими DNase 1 и DNA polymerase 1.

Процесът на транслация на ник започва с ензимна активност на DNase 1. DNase 1 въвежда нишки във фосфатния скелет на двуверижна ДНК чрез разцепване на фосфодиестерни връзки между нуклеотидите. След като се създаде никът, ще се получи свободна 3 'OH група на нуклеотида и върху нея ще действа ензимът ДНК полимераза 1. 5 'до 3' екзонуклеазна активност на ДНК полимераза 1 премахва нуклеотидите от ника към 3 'посока на ДНК веригата. Едновременно действа полимеразна активност на ензима ДНК полимераза 1 и добавя нуклеотиди, за да замести отстранените нуклеотиди. Ако нуклеотидите са маркирани, заместването ще се осъществи с маркираните нуклеотиди и ще маркира ДНК за идентификация. Тази новосинтезирана маркирана ДНК може да се използва като сонди в различни реакции на хибридизация в молекулярната биология.

Фигура 01: Процес на превод на Ник

Какво е Primer Extension?

Удължаването на праймера е техника, която се използва за намиране на специфична РНК последователност от РНК смес и локализиране на 5 'края на иРНК транскрипта. Използва се и за изследване на структурата на РНК и експресията. Методът за удължаване на праймера се извършва с маркирани праймери или с маркирани нуклеотиди. Ако се използват маркирани праймери, това изключва необходимостта от маркиране на нуклеотидите, които се използват за синтеза на cDNA. Има няколко стъпки в тази техника. Започва с извличане на РНК от пробата. След това към сместа се добавя маркиран олигонуклеотиден праймер заедно с необходимите съставки за синтезиране на cDNA на специфична РНК последователност. Грундирайте отгъванията с допълнителната последователност от сместа. Използвайки отпечената последователност на грунда като шаблон,ензимът обратна транскриптаза синтезира комплементарната ДНК (cDNA) на РНК последователността. Отгряване на праймера и обратна транскрипция се случват само когато специфичната РНК последователност присъства в пробата. И накрая, когато се извършва денатурираща гел електрофореза, може да се определи размерът на РНК последователността. Също така е лесно да се намери +1 база на последователността на иРНК (място за иницииране на транскрипция) чрез метода на удължаване на праймера. Количеството на иРНК, присъстващо в пробата, може да бъде определено количествено по този метод, ако се използва излишен праймер. Също така е лесно да се намери +1 база на последователността на иРНК (място за иницииране на транскрипция) чрез метода на удължаване на праймера. Количеството на иРНК, присъстващо в пробата, може да бъде определено количествено по този метод, ако се използва излишен праймер. Също така е лесно да се намери +1 база на последователността на иРНК (място за започване на транскрипция) чрез метода на удължаване на праймера. Количеството на иРНК, присъстващо в пробата, може да бъде определено количествено по този метод, ако се използва излишен праймер.

Фигура 02: Удължаване на грунд

Каква е разликата между Nick Translation и Primer Extension?

Различна статия Средна преди таблица

Nick Translation vs Primer Extension
Преводът на Ник е процес, който създава маркирани ДНК сонди за различни реакции на хибридизация.	Удължаването на праймера е техника, използвана за намиране на специфична РНК или за изследване на генната експресия.
Използвани ензими
Използват се DNase 1 и ДНК полимеразни ензими.	Използва се ензим за обратна транскриптаза.
Значение
Преводът на Ник улеснява маркирането на специфична ДНК последователност.	Удължаването на праймера позволява откриване на специфичен размер на последователността на иРНК и наличното количество в пробата.

Резюме - Превод на Ник срещу разширение на Primer

Преводът на Ник е метод, използван за синтезиране на белязани сонди, базиран на активността на ензимите ДНКаза 1 и Е coli ДНК полимераза 1. Това е метод in vitro, използван в лабораториите преди различни техники на хибридизация. По време на транслацията на ник, 5'-3 'екзонуклеазна активност на ДНК полимераза 1 премахва нуклеотидите преди ника и полимеразната активност на ДНК полимераза 1 замества отстранените нуклеотиди с маркирани нуклеотиди зад ника. Удължаването на праймера е метод, който се използва за откриване на специфична РНК транскрипция от смес и количествено определяне на размера и количеството на интересуващата РНК. Това е разликата между превода на ник и удължаването на буквар.