Ключова разлика - хартия срещу тънък слой срещу колонна хроматография
Хартиената хроматография, тънкослойната хроматография и колонна хроматография са три вида хроматографски техники. Ключовата разлика между хартиената хроматография, тънкослойната хроматография и колонна хроматография се основава на типа на неподвижната фаза, използвана в хроматографската техника. Хартиената хроматография използва целулозна хартия като своя стационарна фаза, тънкослойната хроматография използва алуминиев оксид или силикагел като своя стационарна фаза, докато колоновата хроматография използва колона, натъпкана с подходящ матричен материал като своя стационарна фаза.
В процеса на разделяне и идентифициране на биомолекули като протеини и въглехидрати, хроматографията е важна използвана биофизична техника. Хроматографията разделя съединенията въз основа на тяхната разтворимост, размер и заряд. Въз основа на механизма за разделяне, хроматографията използва механизми като йонообмен, абсорбция, разделяне и изключване на размера и има три хроматографски техники; а именно хартия, тънък слой и колонна хроматография. Хартиената хроматография се основава на твърдо-течна адсорбция и разтворимост на съединението и използва целулозна хартия като стационарна фаза. Тънкослойната хроматография се основава на твърдо-течна адсорбция на молекулите. Той има стационарна фаза, която обикновено е направена от алуминиев оксид или силикагел и подвижната фаза, която е разтворителят. Колонната хроматография използва колона, натъпкана с матрица, която се използва за разделяне на молекулите главно въз основа на техния размер, афинитет или неговия заряд.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед на хроматографията и ключова разлика
2. Какво е хартиена хроматография
3. Какво е тънкослойна хроматография
4. Какво е колонна хроматография
5. Прилики между хартия, тънък слой и колонна хроматография
6. Равно до сравнение - Хартия срещу тънък слой срещу Колонна хроматография в таблична форма
7. Резюме
Какво представлява хартиената хроматография?
Хартиената хроматография е най-простият вид използвана хроматография и не се използва за обширни изследвания. Използва се главно в студентски лаборатории за идентифициране на биомолекули като аминокиселини и въглехидрати, присъстващи в смеси. При хартиената хроматография се използва стационарна фаза, която се прави с помощта на целулозна хартия или филтърна хартия Whatman и подвижна фаза, която обикновено се приготвя с помощта на органични разтворители като n-бутанол и др. По този начин, когато съединенията бъдат забелязани и оставени да протичат в присъствието на подвижната фаза, в зависимост от разтворимостта на съединенията, те се разделят. По този начин, при разработването на хроматограмата, може да се направи оцветяване, за да се определи дължината на всеки цикъл. По този начин може да се изчисли коефициентът на задържане.
Фигура 01: Хартиена хроматография
Хартиената хроматография може допълнително да бъде класифицирана като възходяща хартиена хроматография и низходяща хартиена хроматография в зависимост от посоката на протичащия разтворител.
Какво представлява тънкослойна хроматография?
Тънкослойната хроматография или TLC е често използвана техника за идентифициране на различни аминокиселини, присъстващи в смес или за идентифициране на протеини. Техниката на разделяне се основава на адсорбцията твърдо-течно. По време на тънкослойна хроматография като неподвижна фаза се използва плоча от алуминиев оксид или силикагел. Сместа от разтворители варира според изискванията и може да използва различни комбинации от органични съединения като n-бутанол, оцетна киселина и вода за приготвяне на разтворителя. Съединенията, които трябва да се отделят, се забелязват върху плаката и се потапят в сместа от разтворители. След като разтворителят се движи нагоре въз основа на капилярното действие, дадено от плочата, съединенията, забелязани върху плочата, също се движат в зависимост от тяхната разтворимост в разтворителя.
Фигура 02: Тънкослойна хроматография
Откриването на петна след хроматограмата се извършва чрез различни процедури за оцветяване. Някои използват оцветяване с нинхидрин, което е доста токсичен метод за оцветяване. Съвременните тънкослойни хроматограми използват флуоресцентни техники, за да видят хроматограмата след теста. В зависимост от изминатото разстояние може да се изчисли времето на задържане на всяко съединение. Това може да се използва за идентифициране на вида на съединението, отделено въз основа на използваната смес. TLC се използва главно за идентифициране на аминокиселини в протеинова смес и също така за отделяне на различни видове монозахариди, присъстващи в смес.
Какво е колонна хроматография?
Колонна хроматография е широк термин, използван за описване на много видове хроматографски техники, които използват колонен метод за разделяне. При колонна хроматография се използва физическа колона с опаковъчен материал за отделяне на съединенията. Разделянето може да се основава на различни физични свойства, проявявани от съединенията. Тези свойства могат да бъдат заряд, размер, 3D конформация и капацитет на свързване и т.н. По този начин колоната, натъпкана с матричния материал, действа като неподвижна фаза, а промивният буфер, приложен към колоната, действа като подвижна фаза.
Ако молекулите са разделени в зависимост от размера, опаковъчният материал е опакован по начин, който оставя порите за преминаване на съединенията. По този начин, по-големите молекули, които не могат да преминат през порите, се елуират първо, докато по-малките молекули отнемат много повече време за елуиране.
Фигура 03: Колонна хроматография
Ако молекулите се разделят въз основа на техния заряд, неподвижната фаза ще съдържа или анион, или катионообменник, към който съединенията ще бъдат привлечени въз основа на техния заряд. По този начин по време на етапа на измиване, несвързаните съединения ще се елуират. След добавяне на елуиращ буфер, свързаните заредени съединения ще се елуират. Откриването на тези елуенти се основава най-вече на спектрофотометрични техники.
Какви са приликите между тънък слой хартия и колонна хроматография?
- Всички хартиени тънки слоеве и колонна хроматография се използват три техники за разделяне на биомолекули като аминокиселини, протеини и въглехидрати.
- Техниките за тънък слой хартия и хроматография на колони имат подвижна фаза и стационарна фаза.
- Техниките за тънък слой хартия и хроматография на колони използват биофизични механизми за разделяне.
Каква е разликата между тънък слой хартия и колонна хроматография?
Различна статия Средна преди таблица
Хартия срещу тънък слой срещу колонна хроматография |
|
| Хартиена хроматография | Хартиената хроматография е хроматографска техника, използвана за разделяне на съединенията на базата на адсорбция течност-течност и разтворимост на съединението. Той използва целулозна хартия като своя стационарна фаза. |
| Тънкослойна хроматография | Тънкослойната хроматография е друга хроматографска техника, базирана на твърдо-течна адсорбция на молекулите. Той има неподвижна фаза, направена от алуминиев оксид или силикагел и разтворител като подвижна фаза, която е разтворителят. |
| Колонна хроматография | Колонната хроматография използва колона, опакована с матрица, която се използва за разделяне на молекулите главно въз основа на техния размер, афинитет или неговия заряд. |
| Стационарна фаза | |
| Хартиена хроматография | Хартия от нитроцелулоза на Whatman се използва като неподвижна фаза в хартиената хроматография. |
| Тънкослойна хроматография | Алуминиев триоксид или силикагел се използва като стационарна фаза на тънкослойната хроматография. |
| Колонна хроматография | Като неподвижна фаза в колонната хроматография се използва колона, пълна с подходящ опаковъчен материал. |
| Мобилна фаза | |
| Хартиена хроматография | Текущият разтворител е подвижната фаза на хартиената хроматография. |
| Тънкослойна хроматография | Текущият разтворител е подвижната фаза на тънкослойната хроматография. |
| Колонна хроматография | Промивният буфер е подвижната фаза на колонна хроматография. |
| Механизми, използвани за разделяне | |
| Хартиена хроматография | Хроматографията на хартия се основава на твърдо-течна абсорбция. |
| Тънкослойна хроматография | Тънкослойната хроматография се основава на твърдо-течна абсорбция. |
| Колонна хроматография | Колонната хроматография се основава на изключване на размера, заряд и форма. |
| Буфер за елуиране | |
| Хартиена хроматография | Не се изисква от хартиената хроматография. |
| Тънкослойна хроматография | Не се изисква за тънкослойна хроматография. |
| Колонна хроматография | Задължително при колонна хроматография. |
| Откриване | |
| Хартиена хроматография | Оцветяване и чрез определяне на коефициента на задържане. |
| Тънкослойна хроматография | Оцветяване и чрез определяне на коефициента на задържане. |
| Колонна хроматография | Спектрофотометрично определяне. |
Резюме - Тънък слой хартия срещу колонна хроматография
Хартиената хроматография, TLC и колонна хроматография са техники за разделяне, използвани за разделяне на биомолекули като протеини, аминокиселини и въглехидрати (главно монозахариди). Хартиената хроматография използва целулозна хартия като стационарна фаза, а механизмът на разделяне се основава на адсорбция твърдо-течно. TLC също използва твърдо-течни адсорбционни механизми. Молекулите се разделят на неподвижната фаза, в зависимост от тяхната разтворимост в подвижната фаза. Колонната хроматография използва физични свойства като размер, форма, заряд и молекулно тегло на съединението за разделяне. Колоната, пълна с матричен материал, действа като стационарна фаза, докато промивният буфер действа като фаза разтворител. Това е разликата между тънък слой хартия и колонна хроматография.
