Ключова разлика - Топло срещу студено трипсинизиране
Топлата и студената трипсинизация са два метода, използвани при ензимно дезагрегиране на клетките при култивиране на животински клетки. Ключовата разлика между топлата и студената трипсинизация, както подсказват имената, зависи от температурата, при която трипсинът се добавя за клетъчна дезагрегация. Топлата трипсинизация се извършва при по-високи температурни условия (36,5 - 37 0 C), докато студената трипсинизация се извършва при нискотемпературни условия.
По време на процеса на първично клетъчно култивиране на животински клетки се използват три основни метода и те се оказаха успешни. Трите метода включват механично дезагрегиране на клетките, ензимно дезагрегиране на клетките и основната техника на експлантация. Ензимната дезагрегация на клетките, водеща до изолирането на клетките, се извършва от разграждащия протеините ензим трипсин. Следователно този процес е известен като трипсинизация. Трипсинизацията може да се направи при две различни условия, а именно топла трипсинизация и студена трипсинизация. Топлата трипсинизация е методът за третиране на клетките с трипсин при топли условия при температура 36,5 - 37 0В. Студената трипсинизация е процесът на третиране с трипсин, който протича при по-студени условия, за предпочитане в лед, поддържащ много ниски температури.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Общ преглед и ключова разлика
2. Какво е топла трипсинизация
3. Какво е студена трипсинизация
4. Прилики между топла и студена трипсинизация
5. Равно до сравнение - Топло срещу студено трипсинизиране в таблична форма
6. Резюме
Какво е топла трипсинизация?
Може да се направи трипсинизация за разделяне на клетъчните компоненти, за да се изолират клетките, за да се получи първична клетъчна култура. Трипсинът е ензим за разграждане на протеини и ензимната смес, използвана при трипсинизацията, може да бъде или суров екстракт, или пречистен продукт. Казва се, че суровият екстракт е по-ефективен при лизис на протеини и дезинтеграция на клетки, тъй като съдържа други деградиращи ензими.
Топлата трипсинизация е най-често използваният ензимен метод за дезагрегация на клетките, който се извършва при по-високи температурни условия. Преди лечението чрез трипсинизация желаната тъкан се нарязва на по-малки парчета. Той улеснява лесния процес на дезагрегиране. След това нарязаната тъкан се измива в специална среда, известна като среда за дисекция на базална сол.
След завършване на етапа на измиване клетките се трансформират в колба, съдържаща активния ензим, който е трипсин. Тъй като тази техника предполага топъл протокол за трипсинизация, трипсинът се поставя при температура около 37 ° С за около четири часа.
Фигура 01: Трипсин
Съдържанието се смесва и разбърква с помощта на методи на центрофугиране за улесняване на протокола и за ускоряване на процеса на дезагрегиране. След като се постигне препоръчаното време, клетките могат да бъдат получени от супернатантата. След това клетките, получени от супернатанта, се инкубират при определена температура и време.
Какво е студено трипсинизиране?
Студената трипсинизация е другият тип трипсинизация, която се извършва при студени условия. При тази техника клетките, които се нарязват и измиват, се поставят във флакони върху лед и след това се накисват с трипсин. Периодът на накисване е много по-дълъг - около 6 - 24 часа.
След приключване на процедурата за накисване, трипсинът се отстранява от клетъчния лизат и парчетата тъкан се инкубират допълнително при 37 ° С за около 20 - 30 минути. Дезагрегирането на клетките се осъществява чрез многократно пипетиране на тъканната смес. Това ще позволи на клетките да се отделят от мембраната и да стигнат до супернатантата. След като клетките са в супернатанта, те се инкубират и отглеждат при желана температура и период от време.
Методът на студено трипсинизиране има няколко предимства
- По-висок добив на жизнеспособни клетки, тъй като увреждането на клетките е сведено до минимум. Увреждането на клетките се свежда до минимум, ако не се използват стъпки на центрофугиране.
- Изключително удобен метод.
- По-малко трудоемки.
Основното ограничение на метода за студено трипсинизиране е, че големи количества не могат да се използват едновременно.
Какви са приликите между топлата и студената трипсинизация?
- И при топъл, и при студен процес на трипсинизация се използва ензимът трипсин за дезагрегация на клетките.
- В процесите на клетъчна култура за дезагрегиране на клетките се използват както топли, така и студени процеси на трипсинизация.
- И при процедурите за лечение на топъл и студен трипсинизиране клетките са получени от супернатантата.
Каква е разликата между топлата и студената трипсинизация?
Различна статия Средна преди таблица
Топло срещу студено трипсинизиране |
|
| Топлата трипсинизация е методът за третиране на клетките с трипсин при топли условия при температура от 36,5 - 37 0. | Студената трипсинизация е процесът на третиране с трипсин, който протича при по-студени условия, за предпочитане в лед, поддържащ много ниски температури. |
| Протокол | |
| Нарязаните парчета тъкан се поддържат при 37 ° С непрекъснато през цялата процедура. | Нарязаните парчета тъкан първоначално се поддържат при ледено студени температури и след това се поддържат на 37 0. |
| Температура | |
| Топлата трипсинизация се случва при 36,5 - 37 0 | Студената трипсинизация се случва при ледено студени температури. |
| Потребено време | |
| По-малко време, необходимо за целия процес (около 4 часа) на топла трипсинизация. | Необходимо е по-дълго време (около 6 - 24 часа) за студено трипсинизиране. |
| Добив на жизнеспособни клетки | |
| Ниско съдържание на топла трипсинизация. | Високо в студено трипсинизиране. |
| Използване на центрофугиране | |
| За дезагрегиране на клетките при топла трипсинизация е необходимо центрофугиране. | При студено трипсинизиране не се изисква центрофугиране. |
| Първоначално количество тъкан за трипсинизация | |
| По-голямо количество тъкан може да се използва за топла трипсинизация. | По-малко количество тъкан може да се използва при студена трипсинизация. |
| Увреждане на клетките | |
| Висока благодарение на центрофугирането при топла трипсинизация. | По-малко поради студено трипсинизиране. |
Резюме - Топло срещу студено трипсинизиране
Трипсинизацията е методът за използване на разграждащия протеините ензим трипсин за дезагрегиране и подготовка на първични клетъчни култури по време на процеса на култивиране на клетките. Има две основни техники на трипсинизиране въз основа на температурите, използвани по време на процедурата. Те са топло и студено трипсинизиране. Топлата трипсинизация се извършва при 37 ° С, докато студената трипсинизация се извършва при ледено студени условия. Въпреки че студената трипсинизация отнема повече време за завършване, се казва, че има по-висок добив на жизнеспособни клетки. Това се дължи на факта, че увреждането на клетките се свежда до минимум при студено трипсинизиране, тъй като не се използват енергични етапи на центрофугиране. Това е разликата между топлата и студената трипсинизация.
