Разлика между клониране и субклониране

2024 Автор: Mildred Bawerman | [email protected]. Последно модифициран: 2023-12-16 08:37

Ключова разлика - Клониране срещу субклониране

Клонирането и субклонирането са молекулярно биологични процедури, които създават генетично идентични клетки или организми, носещи ДНК или ген, които представляват интерес. Клонирането е техника, която включва вмъкване на заинтересования ген или ДНК във вектор, репликация на тях в рамките на бактерия гостоприемник и производство на клетки или организми, които са точни копия на генетичния състав. Субклонирането е техника, която включва вмъкване на гена от интерес, който вече е вмъкнат във вектор, във вторичен вектор, негова репликация в бактерия гостоприемник и производство на генетично идентични копия на клетки или организми. Ключовата разлика между клонирането и субклонирането е, че при клонирането гена, който представлява интерес, веднъж лигиран във вектор, продължава процеса на клониране, докато при субклониранетовече клонираният ген, който се интересува, се отделя от родителския вектор и се вмъква отново във вектор на реципиент и продължава процеса.

СЪДЪРЖАНИЕ

1. Общ преглед и ключова разлика

2. Какво е клониране

3. Какво е субклониране

4. Успоредно сравнение - Клониране срещу субклониране

5. Обобщение

Какво е клонирането?

Клонирането е процедурата, която произвежда генетично идентични организми или клетки. В природата клонирането се случва в средствата за безполово размножаване. Когато няма генетична рекомбинация или промяна, дъщерните клетки получават същия генетичен състав на родителя. Прокариотните и еукариотните организми създават клонинги чрез бинарно делене, пъпки, митоза и др. В молекулярната биология клонирането на гени или специфични фрагменти от ДНК е популярен метод за изследване на структурата и функцията на тази конкретна ДНК секция.

Основната цел на молекулярното клониране е да се направят милиони копия на генетично идентични клетки или организми, носещи ДНК фрагмента от интерес (главно гени). Той създава организми с точни генетични копия на друг. Преди всичко специфични гени се клонират в молекулярни изследвания, за да се получи структурна и функционална информация и за секвениране на ДНК. Също така, за производството на специфични протеини или продукти в голям мащаб, клонирането се използва широко.

Процедура за клониране

Основните стъпки на процедурата за клониране са както следва.

1. Идентифициране и изолиране на интересуващия ген. (Усилване на интересуващия ген чрез PCR).
2. Ограничено смилане на гена, който представлява интерес (Ограничителната ендонуклеаза отрязва гена).
3. Ограничено смилане на векторната ДНК. (Векторната ДНК също се изрязва с помощта на същата рестрикционна ендонуклеаза).
4. Вмъкване на гена във вектора и образуване на рекомбинантната молекула.
5. Трансформация на рекомбинантния вектор в бактерия гостоприемник.
6. Изолиране и идентифициране на трансформираните бактерии (плазмидният вектор трябва да съдържа избираем ген, най-често ген за устойчивост на антибиотици за скрининг на трансформирани бактерии).
7. Рекомбинантна генна експресия в гостоприемника.

Фигура_01: Процедура за клониране

Какво е субклониране?

Субклонирането е процедура за преместване на ген от интерес от един вектор в друг вектор, за да се види експресията на гена, за да се получи желаната функционалност на гена. В този метод участват два вектора; а именно родителски вектор и вектор на дестинация. Клонираните вложки се преместват отново във втори вектор при субклониране. Целта на прехвърлянето на гена от първия вектор към втория вектор е да се получи нещо, което не може да бъде направено от първия вектор, или да се отдели ген отново във вече клонирания фрагмент на ДНК и да се експресира сам. В тази процедура в началото се използват ограничителни ензими.

Процедура за субклониране

Основните стъпки на субклониране са както следва.

1. С помощта на рестрикционни ендонуклеази, разделяне на ДНК от интерес в донорния плазмид (родителски вектор).
2. Усилване на интересуващата ДНК с помощта на PCR.
3. Пречистване на PCR продукта (ДНК от интерес) чрез гел електрофореза.
4. Отваряне на реципиентния плазмид чрез същите рестрикционни ендонуклеази, използвани за отделяне на ДНК от интерес в родителския плазмид.
5. Лигиране на ДНК от интерес (ген) в реципиентния плазмид, за да се създаде субклонираният плазмид.
6. Трансформация на субклонирания вектор в компетентна бактерия гостоприемник.
7. Скрининг на трансформирани клетки.
8. Пречистване на плазмидната ДНК и използване за ДНК секвениране или експресия на гените за получаване на желаните продукти.

Субклонирането се извършва в случаи на изолиране на един ген от клонираната група гени или когато генът от интерес е необходим за прехвърляне в полезен плазмид, за да се види точната функция на гена от интерес.

Фигура_02: Процедура за субклониране

Каква е разликата между клонирането и субклонирането?

Различна статия Средна преди таблица

Клониране срещу субклониране
Клонирането е процедурата, която произвежда генетично идентични организми или клетки.	Субклонирането е процедура за преместване на ген от интерес от един вектор в друг вектор, за да се види експресията на гена, за да се получи желаната функционалност на гена.
Процес
Отделете интересуващата ДНК от организма и я вкарайте във вектор веднъж и клонирайте	Вече клонираната ДНК се отделя от първия вектор и се вмъква във втори вектор и се клонира.
Вмъкване на движение чрез вектори
Не премества вложки (ДНК от интерес) от един вектор в друг вектор.	Преместване на вложки от родителски вектор в вектор на местоназначение.

Резюме - Клониране срещу субклониране

Клонирането създава генетично идентични клетки или организми с включения ген или ДНК от интерес. Той протича чрез отделяне и вмъкване на ДНК от интерес във вектор и експресия в бактерия гостоприемник. Субклонирането споделя подобни стъпки с клонирането. При субклониране обаче клонираният вече ДНК фрагмент (ген от интерес) се вмъква във вектор и се трансформира в бактерия гостоприемник. Това е ключовата разлика между клонирането и субклонирането.