PCR срещу PCR в реално време
PCR или полимеразна верижна реакция е революционно откритие в съвременната молекулярна биология, което за първи път е разработено от химика Кари Мълис през 1983 г. Тя позволява да се усилва за анализ единична последователност в сложна ДНК. Основната идея на PCR е, че два праймера, които допълват противоположните нишки на ДНК последователност, са ориентирани един към друг; праймерите произвеждат допълнителни нишки, всяка от които съдържа другия грунд. Следователно, резултатът е голямо количество от последователност, съответстваща на ДНК, която се намира между двата праймера. ДНК полимеразният ензим се използва за удължаване на праймерите в PCR. ДНК полимеразата е термостабилен ензим и има способността да оцелява при високи температури (94 до 95 ° C), използвани за денатурация на матрична ДНК.
PCR включва три стъпки, а именно, многократни кръгове на денатурация, отгряване на праймери и синтез на ДНК. За извършване на тази реакция се използва термоциклерна машина, за да може да бъде програмирана да променя температурите бързо и точно. Приложенията на PCR са криминални разследвания, ДНК пръстови отпечатъци, откриване на патогени и анализ на ДНК на ранни човешки видове.
Какво е конвенционална PCR?
Има три основни етапа на конвенционалната PCR, а именно; ДНК амплификация етап, разделяне на PCR и откриване на продукти. Разделянето на ДНК сегменти обикновено се извършва чрез електрофореза в агарозен гел. След това продуктите се оцветяват с етейдуим бромид. И накрая, откриването се постига чрез визуализиране на ленти върху гелове под UV светлина. Следователно крайните резултати от конвенционалната PCR не се изразяват като цифри. Обикновено конвенционалната PCR е в състояние да открие само един параметър.
Какво е PCR в реално време?
PCR в реално време може да открие амплификацията на продуктите, тъй като продуктите се синтезират. С развитието на технологията PCR се превърна в много популярна техника, особено за откриване и идентифициране на бактерии в храните. PCR в реално време използва флуоресцентна багрилна система и термоциклер, оборудвани с флуоресцентна способност за откриване.
Каква е разликата между конвенционалната PCR и PCR в реално време?
• Конвенционалната PCR отнема повече време, тъй като използва гел електрофореза за анализ на амплифицираните PCR продукти. За разлика от това, PCR в реално време отнема по-малко време, тъй като може да открие амплификации по време на ранните фази на реакцията.
• PCR в реално време събира данни във фазата на експоненциален растеж на PCR, докато традиционната PCR събира данни в Крайна точка на реакцията.
• Резултатите от крайната точка на конвенционалната PCR може да не са много точни, но резултатите от PCR в реално време са много точни.
• PCR в реално време е по-чувствителен от конвенционалния PCR.
• Конвенционалната PCR има много лоша разделителна способност, докато PCR в реално време може да открие много малко промени поради високата разделителна способност.
• Детекцията на крайната точка на конвенционалната PCR има кратък динамичен диапазон, докато PCR в реално време има широк динамичен диапазон.
• За разлика от конвенционалната PCR, автоматизираните техники за откриване се намират в PCR в реално време.
• Конвенционалната PCR е високо усъвършенствана и трудоемка повече от PCR в реално време.
• За разлика от PCR в реално време, конвенционалната PCR не може да прави разлика между мъртвите и живите бактерии.
• PCR в реално време използва флуоресцентна багрилна система за откриване на продуктите, докато конвенционалната PCR използва етидиев бромид и UV светлина за визуализиране на ленти в агарозната гел среда.
